酵母双杂交系统的介绍,酵母双杂交系统是酵母表达质粒（例如，GAL4等）活化结构域基因的转录激活因子，并构建DNA结合结构域基因和转录激活因子（例如，GAL4等）活化域基因。从表达产物分析表达载体以分析两种蛋白质相互作用。
谁能解释一下酵母双杂交系统的基本原理和操作流程,酵母双杂交系统是用于分析酵母中蛋白质 - 蛋白质相互作用的基因系统，也是基于转录因子模块结构的遗传方法。自成立该方法以来，通过不断改进和开发，它不仅可以检测蛋白质之间的相互作用，而且更重要的是，已经发现了与已知蛋白质相互作用的未知蛋白质。
酵母双杂交系统到底是啥回事有啥用,首先建立酵母双杂交系统在研究田地和歌曲的真核基因转录调节方面。典型的真核生长转录因子，例如Gal4，GCN4等含有两个不同的结构域：DNA结合结构域和转录活性结构域。前者可以识别DNA上的特定序列，并使转录激活域在调整后的基因的上游，转录激活结构域可以用作转录复合物的其他成分，开始它调节的基因的转录。两个域不仅可以在其连接区域中打开，但仍然具有各自的功能。此外，不同的两个域可以重建转录激活。酵母双杂交系统U.通过激活表达基因倾斜杂合基因以检测蛋白质蛋白。有两种类型的载体：DNA结合结构域的载体; b含有DNA激活域载体。当构建第二种类型的载体时，必须在读取框架中融合测试蛋白基因和域基因。融合基因在报告中表达，其表达产物仅位于核中以驱动报告者的转录。例如，GAL4-BD具有核定位序列，而GAL4-AD不是。因此，应在Gal4-Ad氨基末端或羧基末端克隆来自SV40的T-抗原的序列序列。序列作为核定位。目前研究中的结合结构域基因包括：GAL4（1-147）; DNA-BD CODLexa（e Coli转录抑制因子）的序列。常用的激活域基因是：Gal4（768-881）和疱疹病毒VP16编码序列等。双混合系统的另一个重要组成部分是报告。报告菌株是指包含报告基因的重组质粒的宿主细胞。最常用的酵母细胞，酵母细胞具有许多优点，因为报道的菌株：<1>易于转化，促进聚丙醇的回收率。 <2>直接选择标记基因和特征记者。 <3>酵母的内源性蛋白质不容易与衍生自哺乳动物的蛋白质。通常编码融合到透明转录调节因子的蛋白质基因（例如，GAL4-BD，Lexa-BD）;另一个基因融为转录Activati在域名（例如Gal4-Ad，VP16）。将活化结构域融合基因转移到表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中，蛋白质之间的作用导致转录因子重建在相邻的报告基因表达（例如LacZ）中产生，并分析蛋白质之间的组合。酵母双杂交系统可以确定蛋白质在体内的结合并具有高灵敏度。主要是由于：1使用高拷贝和强电机的表达载体，杂化蛋白过度表达。 2信号测定在天然平衡浓度条件下进行，例如免疫细胞沉淀，例如免疫细胞沉淀，以实现许多洗涤，降低信号强度。 Activat可以提高3杂化蛋白稳定性域和结合结构域以形成转录开始复合物，后者与启动子DNA组合，这使得每个组分的组合倾向于稳定每个组分。 4通过mRNA产生各种稳定的酶以进行放大。同时，检测方法如酵母表型，X-GAL和HIS3蛋白表达非常敏感。

责任编辑（赖佳新）

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