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- 酵母双杂交原理：典型的真核转录因子，如Gal4，GCN4等含有两个不同的结构域：DNA结合结构域和转录激活结构域）。前者可以识别DNA上的特定序列，并使转录激活域在调整后的基因的上游，转录激活结构域可以用作转录复合物的其他成分，开始它调节的基因的转录。扩展信息：酵母双杂交系统可以确定体内蛋白质的组合并具有高灵敏度。主要是由于：1。使用高拷贝和强电机的表达载体，杂交蛋白过度表达。 2，信号测量在天然平衡CO下进行中旋转条件，并且需要多次洗涤诸如免疫细胞施沉淀的物理方法以实现这种情况，并且信号强度降低。如图3所示，可以激活杂化蛋白稳定性，并且增强结合结构域以形成转录开始复合物，并且后者与启动子DNA结合，并且该三元复合物使每个组分的组合趋于稳定。 4.通过mRNA产生各种稳定的酶。同时，检测方法如酵母表型，X-GAL和HIS3蛋白表达非常敏感。在研究蛋白质的结构功能的研究中，在作用过程中，有时需要通过突变损害蛋白质之间的相互作用，添加抑制剂。这个要求在实际工作中，Vidal等人。开发了一个所谓的反向双混合系统。这项技术的关键是报告基因URA3的引入。 URA3基因在此作用于相反的效果，其编码酶是尿嘧啶合成的临界酶。参考资料来源：Sogou百科全书 - 酵母双杂交
- 2021-09-10 14:59:52
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- 酵母双杂交系统可以确定蛋白质在体内的结合并具有高灵敏度。主要是由于：1使用高拷贝和强电机的表达载体，杂化蛋白过度表达。 2信号测定在天然平衡浓度条件下进行，例如免疫细胞沉淀，例如免疫细胞沉淀，以实现许多洗涤，降低信号强度。通过激活结构域和结合结构域来形成杂种蛋白稳定性以形成转录开始复合物，并且后者与启动子DNA组合，这使得每个组分的组合倾向于稳定各组分。 4通过mRNA产生各种稳定的酶以放大。同时，检测方法如酵母表型，X-GAL和HIS3蛋白表达非常敏感。
- 2021-09-10 14:58:30
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- 酵母双杂交技术的原理,酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用， 启动它所调节的基因的转录。酵母双杂交由Fields在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1-174位氨基酸残基区段的DNA结合域(DNA binding domain，DNA-BD)和位于C端768-881 位氨基酸残基区段的转录激活域(Activation domain,AD).DNA-BD能够识别位于GAL4效应基因(GAL4-responsivegene)的上游激活序列(Upstream activating sequence,UAS),并与之结合. 而AD则是通过与转录机构(transcriptionmachinery)中的其他成分之间的结合作用，以启动UAS下游的基因进行转录. DNA-BD和AD单独分别作用并不能激活转录反应，但是当二者在空间上充分接近时，则呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子,使启动子下游基因得到转录.。
- 2021-09-10 14:58:30
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